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逆转录病毒(Retrovirus),,,又称反转录病毒,,是一种RNA病毒,,,其两端为长末端重复序列(LTR)。。该病毒呈球形,,,有包膜,,,,表面有刺突,,,颗粒直径为100nm左右。。。逆转录病毒基因组有三个基因:Gag-编码病毒的核心蛋白;Pol-编码逆转录酶;Env-编码病毒的被膜糖蛋白。。
逆转录病毒包装及侵染细胞过程
逆转录病毒包装采用三质粒或四质粒系统进行包装,,,收集细胞培养上清,,通过超速离心浓缩纯化和收集病毒。。。。
滴度检测方法:定量PCR检测干扰后细胞基因组中外源DNA拷贝数。。。。
滴度检测原理:逆转录病毒介导外源基因以逆转录方式整合进目的细胞基因组。。。。
逆转录病毒基因表达时,,,,需在逆转录酶的作用下首先将RNA逆转录成DNA,,形成DNA整合前复合体,,,随后进入细胞核随机整合到宿主细胞DNA上,,,,经过转录、、、翻译,,,,完成基因的表达。。。。
逆转录病毒包装及侵染机制
逆转录病毒特点
逆转录病毒的最大特点在于其特异性感染分裂期细胞,,,,这是因为只有当被感染细胞处于细胞分裂期间,,,,逆转录病毒DNA基因组才能接触到宿主细胞的遗传物质。。。
不同病毒的生物学特性比较
基于上述特性,,,逆转录病毒适用于干细胞相关的大量研究,,,如神经干细胞研究、、、、造血干细胞研究。。。体内应用时,,逆转录病毒适用于研究成年新生神经元或胶质前体细胞的工作。。。
逆转录病毒应用案例
1、、、客户发表文章:Scientific Reports. (IF=4.122). Xiong Y S,et.al. (2015). Early treatment of minocycline alle-viates white matter and cognitive impairments after chronic cerebral hypoperfusion. [逆转录病毒, 卒中]
注射部位:小鼠侧脑室SVZ区
载体:pROV-EF1a-GFP
病毒载体:逆转录病毒
病毒滴度:1E+8cfu/mL
注射体积:1ul
2、、、应用案例:Nature.(IF=41.577).Yu YC,et.al. (2009).Specific synapses develop preferentially among sister excitatory neurons in the neocortex. [逆转录病毒, 发育]
注射部位:E12-E13小鼠胚胎
病毒载体:逆转录病毒
注射体积:1ul