病毒载体构建服务包含慢病毒、、腺相关病毒、、、、腺病毒和逆转录病毒载体等,,,,构建内容包括基因过表达载体构建、、、基因定点突变表达载体构建、、用于基因沉默的shRNA设计与构建、、microRNA表达与封闭载体设计与构建、、萤光素酶报告基因载体构建(UTR、、、启动子及其它功能序列)以及Cre-LoxP系统和CRISPR/Cas9基因编辑工具载体设计与构建等,,,力求一站式解决基因功能研究中的基因上调和基因下调需求。。
质粒优势:
①表达时间快,,,导入细胞后约24小时可观察到目的基因表达;
②构建技术简单,,成本低。。。
③硒品汇农业的过表达载体库丰富,,并且过表达的标记丰富
荧光标记:GFP、、、、mCherry、、CFP、、、BFP、、EYFP、、、、mNeonGreen、、tdTomato、、 mScarlet…
标签标记: FLAG、、、 HA 、、、Myc、、、His tag…
抗性标记:Puro、、、Neo、、、、Hygro、、、BSD…
局限性:
①转染试剂具有细胞毒性,,使用后影响细胞状态;
②大部分细胞较难转染,,达不到基因操作目的;
③质粒不整合到细胞基因组,,,只能进行短时间的瞬时表达,,无法进行观察周期较长的实验。。。
由于单纯质粒存在一定的局限性,,根据实验需要需包成病毒进一步满足不同实验的需求。。
不同表达载体的区别
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表达系统 |
真核表达载体 |
慢病毒载体 |
重组腺相关病毒载体 |
重组腺病毒载体 |
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载体基因特性 |
双链DNA质粒 |
RNA逆转录病毒 |
单链DNA病毒 |
双链DNA病毒 |
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外源基因表达时间 |
24h开始表达,,,,持续3-7天 |
2-4天开始表达,,,长时间稳定表达 |
7-14天开始表达 |
1-2天开始表达 |
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插入片段大小 |
8kb左右 |
4kb左右 |
2.8kb左右 |
6kb左右 |
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稳定细胞株筛选 |
难操作 |
可以 |
不可以 |
不可以,,瞬时表达 |
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细胞实验 |
细胞系,,部分转染效率低 |
首选,,广谱,,,,感染效率高 |
不适合 |
广谱,,,感染效率高 |
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动物实验 |
不适合 |
适合,,,,根据观察时间和注射部位 |
首选,,,,根据观察时间和注射部位 |
免疫原性高,,,,慎选 |
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滴度范围 |
无 |
108~109TU/ml |
1012-1013vg/ml |
1010-1011pfu/ml |