基因过表达
工具载体介绍
| 表达系统 | 真核表达载体 | 慢病毒载体 | 重组腺相关病毒载体 | 重组腺病毒载体 |
|---|---|---|---|---|
| 载体基因特性 | 双链DNA质粒 | RNA逆转录病毒 | 单链DNA病毒 | 双链DNA病毒 |
| 外源基因表达时间 | 24h开始表达，，，持续3-7天 | 2-4天开始表达，，长时间稳定表达 | 7-14天开始表达 | 1-2天开始表达 |
| 插入片段大小 | 8kb左右 | 4kb左右 | 2.8kb左右 | 4kb左右 |
| 稳定细胞株筛选 | 难操作 | 可以 | 不可以 | 不可以，，，瞬时表达 |
| 细胞实验 | 细胞系，，，，部分转染效率低 | 首选，，，，广谱，，感染效率高 | 细胞系，，部分血清型转染效率低 | 广谱，，，感染效率高 |
| 动物实验 | 不适合 | 适合，，，，根据观察时间和注射部位 | 首选，，，，根据观察时间和注射部位 | 免疫原性高，，慎选 |
| 滴度范围 | 无 | 108~109TU/ml | 1012-1013VG/ml | 1010-1011PFU/ml |
载体图谱中常见元件介绍
| 元件名称 | 类型 | 用途 |
|---|---|---|
| 启动子 | CMV、、、CAG、、、EF1a、、U6等 | 广谱或特异启动目的基因的表达 |
| hSyn、、、、CaMKIIα等 | 特异性启动子，，，，在特定的组织细胞中启动目的基因的表达 | |
| 蛋白标签 | 3xFLAG、、HA 、、、、6xHis、、、Myc等 | 与目的基因融合表达，，，，常用于检测外源蛋白表达水平 |
|
荧光标记 |
EGFP、、、mCherry、、mNeonGreen等 |
可与目的基因融合或非融合表达用于检测转染、、感染效果 |
| 抗性基因 |
Puro、、、Neo、、、Hygro、、、、BSD等 |
真核抗性，，常用于稳定株筛选 |
|
Amp、、Kan |
原核抗性，，常用于原核细菌培养，，，质粒扩增 |
|
| 连接元件 |
Linker |
用于连接两个基因，，，融合表达时常用，，，可降低因融合表达对蛋白折叠和功能的影响 |
| IRES、、、2A |
用于连接两个基因，，达到非融合表达的效果 |
|
| 其它元件 | WPRE | 增加目的基因的表达 |
载体选择（部分）
| 载体类别 | 编号 | 载体元件 |
|---|---|---|
| 慢病毒过表达 |
GL127 |
pSLenti-CMV-EGFP-3xFLAG-WPRE |
| GL121 |
pSLenti-EF1-EGFP-CMV-MCS-WPRE |
|
| GL107 |
pSLenti-EF1-EGFP-P2A-Puro-CMV-MCS-3xFLAG-WPRE |
|
|
GL122 |
pSLenti-EF1-EGFP-F2A-BSR-CMV-MCS-WPRE |
|
|
GL124 |
pSLenti-EF1-Luc2-F2A-Puro-CMV-MCS-WPRE |
|
| 腺病毒过表达 | H225 |
pADV-mCMV-MCS-3xFLAG |
| H201 |
pADV-mCMV-EGFP-3xFLAG |
|
| H213 |
pADV-mCMV-3xFLAG-EGFP |
|
|
H204 |
pADV-mCMV-mCherry-HA |
|
| 腺相关病毒过表达 | AOV024 |
pAAV-CMV-EGFP-P2A-3xFLAG-WPRE |
| AOV025 |
pAAV-CMV-mCherry-P2A-3xFLAG-WPRE |
|
| AOV064 |
pAAV-hSyn-EGFP-P2A-3xFLAG-WPRE |
|
| AOV065 |
AAV-hSyn-mCherry-P2A-3xFLAG-WPRE |
|
| H9429 |
pAAV-CAG-EGFP-3xFLAG-tWPA |
|
| H9525 |
pAAV-CMV-EGFP-3xFLAG-tWPA |
|
| H10881 |
pAAV-CAG-EGFP-3xFLAG-tWPA |
|
| H10886 |
pAAV-CMV-EGFP-3xFLAG-tWPA |
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