AAV 腺相关病毒
基因操作

内源性基因转录激活/抑制

  通过人为突变Cas9的RuvC1、、、HNH两个剪切位点,,,Cas9蛋白的切割能力损失变成dCas9蛋白,,,,dCas9和sgRNA复合物可以在DNA的特定位置结合在DNA上,,,,在此基础上,,,,研究人员在复合物的后方连接一些转录调控元件,,如转录激活的VP64、、VP16等,,转录抑制的KRAB等,,同时将复合物锚定在基因转录起始区域的上游,,,,即可实现对特定基因的转录激活或转录抑制。。。

 优势

  ① 常规基因过表达都是将外源基因转入,,外源基因的兼容性必然低于内源基因。。。。
  ② 对于一些涉及多次跨膜的蛋白,,外源转入的基因常表达功能不完整的蛋白,,导致过表达无效,,,,而对内源基因的转录激活无需担心此问题。。
  ③ 由于容量问题,,,很多大的基因片段难以构建进载体,,,,而基于dCas9蛋白的转录激活识别的是转录起始点,,,对于基因大小无要求,,因此可用于研究大基因片段的过表达。。

 载体选择(部分)

可以对特定基因进行内源性的转录激活或抑制。。
载体类别 编号 载体元件
CRISPRa(转录激活)慢病毒载体 H7284

pCLenti-U6-gRNA-2x(wt+f6)MS2-CMV-MCP-P65-HSF1-IRES-BSR-WPRE

H7281

pLenti-CMV-dCas9-VP64-T2A-Puro-WPRE

H9517

pCLenti-U6-gRNA-MS2-EFS-dCas9-VP64-T2A-BSD-WPRE

E2577

pCLenti-EF1a-MCP-P65-HSF1-T2A-Hygro-WPRE

CRISPRa(转录抑制)慢病毒载体

H6929

pCLenti-U6-gRNA-2x(wt+f6)MS2-CMV-NLS-MCP-KRAB-IRES-BSR-WPRE

H7283

pLenti-CMV-dCas9-KRAB-T2A-Puro-WPRE


 相关技术服务

  • 基因过表达

  • 基因干扰

  • CRISPR/Cas9


上一篇:没有了
下一篇:CRISPR/Cas9
一键拨号 一键导航
扫码反馈

扫一扫,,,,反馈当前页面

咨询反馈
扫码关注

硒品汇农业生物

返回顶部
站点地图